|
高效液相色譜日常維護要點-沖洗色譜分析的重要作用之一是對樣品進行定量,色譜定量的依據(jù)是:組分的分量或濃度與檢測器的呼應(yīng)信號成正比。挑選適宜的定量辦法時,除需求考慮相對定量仍是jue對定量外,一起也需求考察化合物的線性呼應(yīng)范圍、是否有適宜內(nèi)標、是否有規(guī)范品等。常見的定量辦法有內(nèi)標法、外標法、面積歸一法、加校對因子的主成分本身對照法與不加校對因子的主成分本身對照法等。本文將對常用的內(nèi)標法、外標法、面積歸一法三種辦法進行介紹。 內(nèi)標法 內(nèi)標法是將必定分量的純物質(zhì)作為內(nèi)標物加到必定量的被分析樣品混合物中,依據(jù)測試樣和內(nèi)標物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比及相對校對因子,來核算被測組分的含量。 精細稱(量)取對照品和內(nèi)標物質(zhì),別離配成溶液,各精細量取適量,混合配成校對因子測定用的對照溶液。取必定量進樣,丈量對照品和內(nèi)標物質(zhì)的峰面積,核算校對因子。 再取按規(guī)范制備中含內(nèi)標物質(zhì)的供試品溶液,進樣,丈量供試品中待測成分和內(nèi)標物質(zhì)的峰面積,再核算含量(其間Ax:供試品圖中待測成份峰面積;A`S: 供試品圖中內(nèi)標物峰面積;C`S:供試品圖中內(nèi)標物濃度)。 內(nèi)標物的挑選要求: a原樣品中不含組分; b與待測物保留時刻應(yīng)接近,但不重疊; c為高純度規(guī)范物質(zhì),或含量已知物質(zhì); d在給定色譜條件下具有必定化學(xué)穩(wěn)定性。 外標法 外標法是用待測組分的純品作對照物質(zhì),以對照物質(zhì)和樣品中待測組分的呼應(yīng)信號相比較進行定量的辦法。它不是把規(guī)范物質(zhì)加入到被測樣品中,而是在與被測樣品相同的色譜條件下獨自測定,把得到的色譜峰面積與被測組分的色譜峰面積進行比較求得被測組分的含量。此法可分為外標一點法與規(guī)范曲線法。 規(guī)范曲線法:是用對照物質(zhì)制造一系列濃度的對照品溶液確定作業(yè)曲線,求出斜率、截距。在完全相同的條件下,精確進樣與對照品溶液相同體積的樣品溶液,依據(jù)待測組分的信號,從規(guī)范曲線上查出其濃度,或用回歸方程核算,作業(yè)曲線法也可以用外標二點法代替。 外標一點法:是用一種濃度的對照品溶液對比測定樣品溶液中組分的含量。 精細稱(量)取對照品和供試品,制造成溶液,別離精細稱取必定量,進樣,丈量對照品溶液和供試品溶液中待測物質(zhì)的峰面積(或峰高)來進行核算: 如規(guī)范中有體系適用性要求,首要需承認體系溶液能滿意條件,否則檢測無效。一般要求對照品制造兩份,一份連續(xù)進5針以核算RSD,如無特殊要求,RSD不超過2%。符合了,說明體系沒問題,再進行后面的試驗。樣品也相同需求制造兩份,兩份樣品zui終成果的RSD相同不能超過2.0%。 面積歸一法 由于組分的量與其峰面積成正比,按各種類項下的規(guī)定,制造供試品溶液,取必定量進樣并記錄色譜圖,測得各峰的峰面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積,核算各峰面積占總峰面積的百分比。 核算公式: 總雜(%)=1-主成分峰面積百分比 單雜峰直接從積分成果表中讀取即可 此法成果很不精確,一般在工藝研究、質(zhì)料組成過程中的中間體等中用來檢測大致數(shù)據(jù)做參考用。 |